全自動核酸提取儀可以進行液體分液、吸液等自動完成,甚至能通過整合擴增、檢測等功能,實現(xiàn)標本提取、擴增、檢測全自動化。提取核酸只是其功能的一個應用。
全自動核酸提取儀可以應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業(yè)和分子生物學研究等多種領域。以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,再通過移動磁珠或轉移液體來實現(xiàn)核酸的整個提取純化過程。
在核酸檢測實驗室拿到樣本之后,進行核酸檢測時,首先要做的就是使用自動核酸提取儀將樣本中的核酸提取出來,提取出的核酸直接關系到后續(xù)的檢測,一般核酸提取的主要步驟分為四步:裂解、吸附、洗滌和洗脫,每一步出現(xiàn)問題都會影響磁珠的提取效率。
洗滌是去除DNA以外的RNA、蛋白質等雜質。關系到核酸的純度,磁棒的振蕩幅度和混合時間會影響洗滌效率。磁棒振蕩幅度太小或混合時間太短,有雜質殘留在磁珠上會影響磁珠吸附核酸的能力。振蕩太劇烈或時間太長,會丟失部分核酸或造成核酸的斷裂、降解,得率下降。
洗脫是解離吸附在磁珠上的DNA,得到純度和濃度均很高的DNA,直接影響核酸得率,影響洗脫效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脫溫度和時間。磁珠未充分晾干,可能會有醇類等雜質殘留,影響后續(xù)PCR反應。
磁珠過分干燥,核酸可能會干結在磁珠上,導致洗脫效率下降。適當提高洗脫溫度和時間,有利于核酸從磁珠上游離下來,時間過長或溫度過高,核酸有可能會降解,需要把握其中的平衡。