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梯度PCR儀跑膠有問題怎么辦?

更新時間:2022-11-11瀏覽:1240次
  梯度PCR儀與普通PCR儀的區(qū)別在于溫度的控制上面,普通PCR的孔所有溫度是一樣的,而梯度PCR儀卻能夠讓不同的孔有不同溫度,比如橫向有12個孔,退火溫度可以從低到高。
 
  梯度PCR儀與普通PCR儀的區(qū)別主要是在功能上,而功能的體現(xiàn)主要是在溫度上,而在性能上的體現(xiàn)確實大大不同的。由于傳統(tǒng)的普通PCR儀一次只能運行一個特定的退火溫度,因此如果要設(shè)置不同的退火溫度,那么就需要多次運行才能夠?qū)崿F(xiàn),這一過程需要花費大量的時間
 
  PCR儀實際就是一個溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制,而梯度PCR儀的梯度也要做一下介紹,梯度實際上是指PCR時退火溫度條件可以設(shè)置一系列不同的溫度梯度,因此人們把這樣的PCR儀稱之為是梯度PCR儀。廣泛應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗、檢疫等領(lǐng)域的一款儀器設(shè)備,在實驗室中的應(yīng)用頻率很高,
 
  PCR跑膠,目的條帶很亮,但是邊沿不清楚,前后有拖尾現(xiàn)象。出現(xiàn)這樣的問題,則需要進行細致的分析,因為引起該問題的可能很多。可先檢查是否模板質(zhì)量問題,如有降解等,模板應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 
  也有可能是抽提RNA時有污染,則需要重新抽提RNA。此外,也可能是非特異性擴增引發(fā)該問題,可提高退火溫度,少循環(huán)次數(shù)。電泳緩沖液時間太長,ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時電壓太高、電泳液過久沒換,電泳膠臟了等都可能引發(fā)該問題。
 
  如果不是由上述原因引起,則進一步檢查加樣量是否過大,制膠過程中膠孔是否制好,EB是否沖洗干凈、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴增的條件不合適。針對具體原因再采取相應(yīng)的措施。

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