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來看看數(shù)字PCR儀大致應(yīng)用在哪些方面

更新時間:2024-11-22瀏覽:1300次
  一、基因表達(dá)量差異研究
  數(shù)字PCR儀檢測時不依賴傳統(tǒng)的Ct值即可實現(xiàn)真正意義上的絕對定量,從而提供了比實時熒光定量PCR更精確的基因差異表達(dá)研究,尤其對于那些靶基因表達(dá)差異微小的情況,如microRNA的表達(dá)分析,等位基因的不平衡表達(dá),單細(xì)胞基因表達(dá)分析等等。
  二、表觀遺傳學(xué)及基因組學(xué)的研究
  1.拷貝數(shù)變異(CNV)研究:微滴化的樣品處理及檢測,這種繞過Ct值的計算方法而直接獲取目標(biāo)基因的絕對拷貝數(shù),為拷貝數(shù)變異的研究提供了絕對的檢測精度。是其他諸如二代測序、芯片雜交等平臺無法達(dá)到的。
  2.甲基化含量鑒定:作為表觀遺傳學(xué)研究中重要的一個研究方向--甲基化程度分析,現(xiàn)階段有不同的方法或技術(shù)來進(jìn)行研究:如傳統(tǒng)的亞硫酸氫鹽處理后的克隆測序統(tǒng)計法、抗體檢測法、定量PCR檢測法等。這些方法皆因方法學(xué)的問題而不能獲得精確的定量,而數(shù)字PCR儀通過對樣品的微滴化處理及目標(biāo)因子的絕對拷貝數(shù)定量,為甲基化程度的精確定量檢測提供了一種全新的技術(shù)。
  3.低豐度及稀有序列的精確定量:目前對于低豐度目標(biāo)序列的檢測,定量PCR、雜交等方法都因受到背景DNA的干擾,使得檢測靈敏度及精確性都達(dá)不到精細(xì)定量的要求(如定量PCR檢測中Ct值大于33的情況下,其重復(fù)性就不是很高),而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過核心的微滴化處理,使得稀有的核酸序列從大量的背景DNA中分離出來,從而提高了檢測的靈敏度及精確性。具體應(yīng)用如在體液(血液、尿液、糞便等)中對腫瘤核酸標(biāo)記物的檢測。
  三、醫(yī)學(xué)檢測中的優(yōu)勢
  1.無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷技術(shù):無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷,如21染色體為3倍體的唐氏綜合征(現(xiàn)有人使用二代測序進(jìn)行深度測序)、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(跟孟德爾遺傳規(guī)律相關(guān)遺傳)。因為標(biāo)本來源于目前的血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準(zhǔn)確性。而QX200檢測系統(tǒng)*的微滴化技術(shù)可以代替剛剛興起的二代測序法來進(jìn)行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷,從而提高工作效率及節(jié)約成本。
  2.數(shù)字PCR儀個性化基因治療的應(yīng)用:我們常用的檢測標(biāo)本常常是如血液、糞便、尿液等體液來源,對于這些標(biāo)本中的DNA,其有兩種來源途徑:正常脫落體細(xì)胞的DNA和病變脫落細(xì)胞的DNA,而正常脫落體細(xì)胞的DNA量是遠(yuǎn)大于病變組織脫落細(xì)胞的DNA量的,為此通過微滴化處理就能在每個微滴中有效的減少體細(xì)胞DNA的干擾,實現(xiàn)腫瘤標(biāo)記物的有效檢測,可應(yīng)用于個性化基因治療(如肺癌等相關(guān)的EGFR、KARS、BRAF基因的SNP突變檢測從而來指導(dǎo)用藥方案的選擇與調(diào)整)

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